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關于細胞凍存液的操步驟詳細說明

更新時間:2018-01-18 點擊次數:5123
細胞凍存液操作步驟
(一)細胞凍存
1.配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養液,取對數生長期的細胞,去除舊培養液,用PBS清洗,去除PBS,加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養皿表面)把單層生長的細胞消化下來, 離心1000rpm,5min;
2.去除胰蛋白酶,加入適量配制好的凍存培養液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數,調節凍存液中細胞的zui終密度為5×106/ml~1×107/ml,將細胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
3.在凍存管上標明細胞的名稱,凍存時間及操作者,凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內。
(二) 細胞復蘇
1.從液氮容器中取出凍存管,直接浸入37℃溫水中,并不時搖動令其盡快融化,從37℃水浴中取出凍存管,打開蓋子,用吸管吸出細胞懸液,加到離心管并滴加10倍以上培養液,混勻;
2.離心, 1000rpm,5min;棄去上清液,加入含10%小牛血清培養液重懸細胞,計數,調整細胞密度,接種培養瓶,37℃培養箱靜置培養;
3.次日更換一次培養液,繼續培養。
注意事項
1.從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養細胞都可以用于凍存,但為對數生長期細胞。在凍存前一天換一次培養液;
2.將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護工作,以免凍傷;
3.凍存和復蘇用新配制的培養液。
想了解更多細胞凍存液相關信息,咨詢

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