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細胞凍存解決方案

更新時間:2015-12-08 點擊次數:3368
 細胞凍存解決方案
細胞凍存步驟
1.預先配制凍存液:10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存預冷; 2.用胰酶對細胞進行消化:倒去培養瓶中的培養基或用槍小心吸去培養板中的培養基,PBS沖洗兩次,用胰酶消化細胞(盡可能溫和); 3.再次用*培養液懸浮細胞,將預冷的凍存液加入消化*的細胞中,用滴管輕輕吹打混勻。 4.在每支凍存管中加入1ml細胞液,密封后標記凍存細胞名稱和凍存日期。 5.凍存步驟的細致直接關系到細胞復蘇時的活力,如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后轉到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐。

解決方案
1.凍存液:A:dmso 推薦 sigma (貨號D2650-100ml) B:胎牛血清根據自己習慣 1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高壓 滅菌 2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存.. 3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比) 2.胰酶(hyclone 貨號 sh30042.01) pbs (hyclone 貨號sh30256.01b) 培養瓶,離心管 推薦coring 或者 falcon 槍頭 推薦axygen (axygen槍頭已經基本國產化) 3.凍存管 推薦axygen的彩色凍存管,有各種顏色的蓋子,方便分類。且性價比較高。目前市場上nunc 和corning的一次性凍存管使用也很廣泛,但如果量大不如axygen凍存管劃算。現在還提供底部印有二維碼的方便識別的凍存管。 4.凍存盒:推薦使用biologix的紙質凍存盒,標注清晰,書寫后不容易掉色,且有各種顏色可選。同時也 有塑料凍存盒供使用。質量高,價格低。 5.程序降溫盒:推薦 nalgene(貨號 5100-0001)。使用zui廣,*的程序降溫盒。 6.液氮罐:根據需求,1000個樣本的儲存空間,推薦金鳳的yds-50b-125,含6個6層25孔方提桶,保 護罩及一只真空安全帽,含不銹鋼盒,zui多放900只樣本。 7.另外還有冷凍記號筆,不銹鋼凍存盒架,細胞濾網,凍存管支架等等。

液氮罐使用注意事項:
1. 容器的使用維護:充液氮前要用少量的液氮預冷;補充液氮的時機是液氮剩余量為總容量的1/3為宜; 嚴禁在容器蓋上放置物體和密封瓶口;嚴防敲擊碰撞。 2. 不能用其他塞子代替罐蓋,更不能密封塞子,以免液氮蒸發,壓力增高,損傷容器;檢查容器液 面高度時,應用塑料小棒或實心小木棒插入底部,過5-10s后取出,結霜的長度即為液面高度。

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