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MSC人間充質干細胞流式鑒定配色方案

更新時間:2017-11-17 點擊次數:11145

MSC人間充質干細胞流式鑒定操作步驟

 

流程

準備細胞——抗體染色——上機檢測

 

1、準備細胞:取培養的細胞離心(300 g/5min),棄去上清, 加入一定量PBS洗滌一次,棄去上清,彈散細胞,細胞重懸到5×106~10×106之間

 

2、MSC人間充質干細胞流式鑒定配色方案

取100 ml的細胞于EP管或流式管內,分三管染色

*管 陽性配色 Anti-human CD90 FITC, Anti human CD105 APCAnti-human CD45 PE-Cy7各加5 ml

第二管 陰性配色 Anti-human HLA-RA FITC, Anti-human CD34 PE-Cy7, Anti-human CD73 APC各加5 ml

第三管同型對照 Mouse IgG1 K Isotype Control FITC 0.6 mlMouse IgG1 Isotype Control PE-Cy7 1.2 ml,Mouse IgG1 Isotype Control APC 1.2 ml

 

配色依據:細胞治療協會間充質和組織干細胞委員會2006年提出了MSC鑒定的zui低標準,關于細胞表型的要求是表達CD90, CD105和CD73不表達CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA-DR;陽性指標都需要染色,陰性指標一般選擇2-3個指標,因為是做細胞表型鑒定,所以要配齊同型對照。

 

3、加入相應的抗體后混勻,建議彈管子,盡量不用槍頭直接吹打,室溫避光孵育15 min,染色過程中再混勻一次

4、染色完成后加入1 ml的PBS洗滌細胞,離心300 g/5min

 

5、棄去上清,彈散細胞,加入500 ml PBS重懸,上機檢測。

注意:1、同型對照是根據染色抗體的用量來計算的,所以每種同型對照可能加入量可能不一樣(具體可看后文同型對照章節的介紹)。

   2、先上機檢測同型對照管,各檢測通道以這一管的信號設為陰性,在上機檢測抗體染色管。

   3、zui后結果的顯示用峰圖來表示,每種抗體的檢測結果都與對應的同型對照染色結果疊加展示( overlay )。

 

MSC人間充質干細胞流式鑒定結果

 

 

注意:CD90表達量非常高,所以建議用FITC熒光染料,FITC/PE-Cy7/APC這三種熒光染料之間幾乎沒有補償,所以這三種染料一起染色不需調節補償,如果是做臍帶干細胞的鑒定,CD105抗體選擇SN6克隆號,其他克隆號染色結果不好(某些克隆號染不上)。

 

MSC人間充質干細胞流式配色抗體

 

品牌

產品編號

產品名稱

規格

價格

BioGems

03011-50

  Anti-Human CD90 (Thy-1) FITC

25 test/100 tests

25 test

1540元

BioGems

07111-77

  Anti-Human CD45 PE-Cy7

25 test/100 tests

25 test

1680元

BioGems

17111-80

  Anti-Human CD105 (Endoglin) APC

25 test/100 tests

25 test

2170元

BioGems

74111-50

  Anti-Human HLA-DR FITC

25 test/100 tests

25 test

1400元

BioGems

06411-77

  Anti-Human CD34 PE-Cy7

25 test/100 tests

25 test

2170元

BioGems

05811-80

  Anti-Human CD73 APC

25 test/100 tests

25 test

1960元

 

 

同型對照

總價

10920元

BioGems

44212-50

  Mouse IgG1 K Isotype Control  FITC

100 mg

1120元

BioGems

44212-77

  Mouse IgG1 Isotype Control  PE-Cy7

100 mg 

1890元

BioGems

44212-80

  Mouse IgG1 Isotype Control APC

100 mg

1750元

 

 

MSC人間充質干細胞流式鑒定配色方案由Biogems提供。Biogems是PeproTech的流式抗體品牌,質高價惠,現正進行一系列*活動。

 

MSC人間充質干細胞流式配色抗體產品由重慶市華雅干細胞技術有限公司授權代理,。重慶市華雅干細胞技術有限公司以“專注干細胞研究,提升干細胞品質為發展理念,專業從事干細胞基礎研究、干細胞再生醫學臨床應用研究及干細胞技術服務。

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